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  • 脂质体2000转染法的经验分享
  • 点击次数:533 发布时间:【2018-04-03】
  •    脂质体2000转染法的经验分享:

      1、转染前1天将0。5~2×105细胞接种于24孔培养板,并加入500ul不含抗生素的完全培养基,以保证转染时细胞汇合达90~95%。

      2、准备复合物

      (1) 将0.8ug DNA稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中轻轻浑匀。

      (2) 将2ul Lipofectamine2000稀释于50ul无血清无抗生素的培养液中,轻轻浑匀,室温孵育5分。注意:必须在25分内进行。

      (3) 5分后将它们混合,并轻轻浑匀,室温孵育20分。

      3、吸去培养板的培养基,用PBS或无血清培养基(zui好)清洗细胞2次。

      4、将复合物(总体积100ul)加入培养孔,前后摇动培养板使其分布均匀。

      5、将细胞放入培养箱孵育4~6h后,可以更换含血清培养液去除复合物(也可不用)。

      6、24~48h后可以观察转入基因表达情况。

      7、稳定转染:换含血清培养基24h后将细胞以1:10(或更高比例)传代,1天后更换筛选培养基筛选。

      8、优化:要保证细胞汇合率达90~95%(比较高);DNA/ Lipofectamine2000比率1:0.5~1:5,一般细胞1:2~3.

      脂质体2000转染法的主要优点是可用将DNA转染至悬浮或者铁壁细胞培养、转染效率相对较高、对基因片段大小的限制较小等,但是

      阳离子脂质体2000对细胞的毒性相对较高,为了防止其毒性,要摸索好如下实验条件:脂质体2000与质粒的比例、细胞转染时间等。

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